样本类型：小鼠肺组织（Lung）、小肠固有层（ small intestine lamina propria, siLP）

抗体方案：

圈门策略：

实验结果：

首先通过FSC-A/SSC-A圈出主细胞群体，FSC-A/FSC-H去除粘连体，SSC-B-A/SSC-A去除红细胞干扰，在活细胞下圈出CD45+群体，通过IL-7Rα+lin-圈出总的ILCs（FigA-B）。

在肺组织的总ILCs中，通过PLZF+IL-18Rα+圈出ILCP（FigC）。

分别在肺组织（FigD）和siLP（FigE）中对ILC亚群进行细致地划分：首先通过RORγ和T-bet双散点图区分出T-bet+ RORγt-、T-bet-RORγt-、T-bet+/-RORγt+三个群体：

1. 在T-bet+ RORγt-群体下通过CD49b-ST2-NKP46+IL18Rα+识别出ILC1细胞，同时通过TRAIL和CD49a可将ILC1继续细分成TRAIL+ILC1细胞和CD49a+ILC1细胞；

2. 在T-bet-RORγt-群体下GATA3+可成功圈出ILC2细胞，继续通过ST2和KLRG1可将ILC2细胞细分成KLRG1-ILC2、KLRG1+ILC2和ST2-ILC2;

3. 在T-bet+/-RORγt+去群体下，通过NKP46和CCR6可将ILC3进一步分成NCR+ILC3（NKP46+CCR6-）、NCR-ILC3（NKP46-CCR6-）和CCR6+ LTi-like ILC3（NKP46-CCR6+）。

为了研究小鼠肺组织（FigF）和siLP（FigG）的细胞因子分泌及增殖情况，使用激活剂和特异细胞因子对细胞进行了体外激活培养。经过刺激后，肺组织中的ILC1产生了大量的IFN-γ；siLP中ILC2和ILC3的IL-13和IL-22有明显的上升趋势。

此方案不仅可以对ILCPs和ILC的3个亚群进行定义，而且可以利用方案中CD11b实现对成熟NK细胞（表型为CD11b⁺NKp46⁺T-bet⁺）研究（FigH）。同时加入特异性细胞因子和增殖标记物来分析ILC和NK细胞的功能特征。全面多维度分析小鼠组织中不同ILCs的表型和功能状态的特点，充分展示这个方案的多样性和灵活性。

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