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层浪流式笔记-间充质干细胞标志物检测

近些年,以干细胞治疗为基础的再生医学逐渐发展起来。间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)作为干细胞的一种,正受到全世界科学家的关注。


间充质干细胞(MSC)是一类存在于多种组织(如骨髓、脐带、胎盘、脂肪等),具有自我更新能力和多向分化潜力的成体干细胞。具有易获取、低免疫原性、低致瘤性、良好增殖率等多个特点,因在免疫调节和组织再生上的巨大潜力而受到更多的关注。


Duc M Hoang教授2022年发表了一篇综述[1],对间充质干细胞(MSC)在各系统疾病治疗领域的最新临床研究成果进行了系统性的总结,包括神经系统疾病、肺功能障碍、代谢/内分泌相关疾病、生殖障碍、皮肤烧伤和心血管疾病等。文中提到,在临床试验中,MSC治疗是安全的,不过仍需要进行大规模的临床试验。MSC来源特异性的疾病治疗也是研究者关注的一个方向。


截止2023年8月底,我国已有近70种MSC药物获得药物临床试验申请(IND)受理(数据来源于国家药品监督管理局药品评审中心),涉及较多的适应症,包括膝骨关节炎、间质性肺病、移植物抗宿主病及急性呼吸窘迫综合征。

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图1:MSC来源及分化(来源:DOI:10.1080/17474124.2018.1393332)

在间充质干细胞的研究中,细胞的鉴定是很重要的一个环节。


自1991年MSC的概念提出后,科学家们使用不同的分离培养方法,用不同的标志物来研究MSC,没有形成统一的鉴定标准,增加了MSC研究的难度。因此,国际细胞治疗协会(ISCT)在2006年定义了MSC的最低标准[2],是目前被广泛接受的一种鉴定方法, 如Table1所示:

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接下来小编为您展示下层浪LongCyte™流式细胞仪检测MSC表面标志物的数据。



实验方案:


图片1.jpg

图2:MSC表面标志物配色方案


染色步骤:




Part.

1

取传代培养的人脐带间充质干细胞(h UCMSCs),胰酶消化收集细胞,加入PBS调整细胞浓度为10 x10cells/ mL;

Part.

2

取7个流式管,每管分别加100ul细胞悬液,空白管不加抗体,其余的管按照抗体使用说明书分别加入相应荧光抗体CD90-FITC、CD105-PE、CD73-APC、CD45-PE-Cy7、CD34-APC-Cy7、HLA-DR-AF700,混匀,室温避光孵育30 min;

Part.

3

加2mlPBS,1500r,离心5 min,弃上清液,加入300ulPBS重悬细胞;

Part.

4

上流式细胞仪,检测细胞表面标志物的表达。


数据展示:



数据展示.jpg

图3:MSC表面标志物检测(A:主细胞群;B-G:分别是阳性指标CD73、CD105、CD90和阴性指标HLA-DR、CD34、CD45的百分比


圈门逻辑:




01

通过FSC-H/SSC-H设门,排除碎片,圈出主细胞;

02

建立直方图,横坐标分别选择CD73、CD105、CD90、HLA-DR、CD34、CD45;

03

在仪器软件上选择图层编辑功能,与空白管对应指标的直方图进行叠加,得到每个指标的百分比。


总结:

1.

层浪LongCyte™流式细胞仪软件操作简单,可直接获得峰形叠加图,进行归一化和平滑处理,对流式图进行美化处理;

2.


有批量操作功能,可批量自动上样,批量分析数据,批量导出流式图,节约整体实验时间。


层浪临床型LongCyte™3光14色流式细胞仪可满足多种荧光染料同时使用,欢迎大家使用层浪流式细胞仪,共同探索更多的多色流式检测方案。 


  图4:层浪生物LongCyte™3光14色流式细胞仪


参考文献:

(1)Duc M. Hoang , Phuong T. Pham,etal.Stem cell-based therapy for human diseases.
Signal Transduct Target Ther.2022 Aug 6;7(1):272.

(2)Dominici, M,Le Blanc, K,etal.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

(3)F Gao 1, S M Chiu,etal.Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects.Cell Death Dis,2016 Jan 21;7(1):e2062.

(4)Hajir Ibraheim 1, Chiara Giacomini,etal.Advances in mesenchymal stromal cell therapy in the management of Crohn's disease.Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2018 Feb;12(2):141-153.




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